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MspI限制性内切酶图片
产品货号:
BM0031
中文名称:
MspI限制性内切酶
英文名称:
LightFlash MspI Restriction Endonuclease
产品规格:
250T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

LightFlash快速内切酶是一系列经过基因工程重组的快速限制性内切酶,适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。所有LightFlash快速内切酶在通用的CutFlash或CutFlash Color Buffer中都具有优良的活性,能够在5~15分钟内完成酶切。此外,百奥莱博的快速碱性磷酸酶T4 DNA快速连接酶在CutFlash Buffer中均具有100%活性,支持一管化反应,提升“酶切-修饰-连接”的体验。


CutFlash Color Buffer包括红色和黄色示踪染料,可将产物直接用于凝胶电泳。CutFlash Color Buffer的红色染料与2500bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近;黄色染料与10bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近。




5'…CC G G…3'
3'…G G CC…5'



组分规格
LightFlash MspI250μL
10×CutFlash Buffer2×1mL
10×CutFlash Color Buffer2×1mL
保存:-20℃


1×CutFlash Buffer,37℃温育,可在5~15min内完成反应。


不可热失活,请使用酚氯仿抽提或柱纯化。


  • 功能活性检测:37℃下,在20μL通用CutFlash反应体系中,1μL LightFlash MspI能够在15min内完全消化1μg λDNA。
  • 超长时间温育检测:37℃下,在20μL通用CutFlash反应体系中,将1μL LightFlash MspI与1μg λDNA共同温育3h,未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。更长时间酶切可能出现星号活性。
  • 酶切-连接-再酶切检测:37℃下,使用10倍酶量的LightFlash MspI消化DNA底物,回收酶切产物,在22℃下使用T4 DNA Ligase (Fast)可以将超过95%的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开95%以上的连接产物。



  • 不同DNA中的酶切位点数量
    λDNAΦX174pBR322pUC57pUC18/19SV40M13mp18/19Adeno2
    3285261313118171
  • 甲基化修饰影响
    DamDcmCpGEcoKIEcoBI
    无影响无影响无影响无影响无影响
  • 在不同反应缓冲液中的活性
    CutFlash BufferFastDigest BufferCutSmart BufferQuickCut Buffer
    100%25%100%25%



  • DNA快速酶切流程
    • 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:
      成分质粒DNAPCR产物基因组DNA
      ddH2O15μL16μL30μL
      10×CutFlash Buffer2μL3μL*5μL
      底物DNA2μL (up to 1μg)10μL (~0.2μg)10μL (5μg)
      LightFlash MspI1μL1μL5μL
      总体积20μL30μL50μL
      *:本体系适用于经过纯化的PCR产物酶切。未纯化的PCR产物具备一定的离子强度,10×CutFlash Buffer加入量可适当减少至2μL。但由于DNA聚合酶同时具有外切酶活性,会影响酶切产物,因此如下一步需进行克隆等操作,建议酶切前对PCR产物进行纯化。
    • 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴;
    • 37℃温育15min(质粒),或15~30min(PCR产物),或30~60min(基因组DNA);
    • 酚氯仿抽提或柱纯化(可选);
    • 如果使用CutFlash Color Buffer进行酶切反应,得到的产物可以直接进行上样电泳。
  • 双酶切或多酶切
    • 每种快速内切酶的用量为1μL,并根据需要适当扩大反应体系;
    • 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10;
    • 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切反应。
  • 适用于质粒的扩大反应体系
    DNA(μg)12345
    LightFlash MspI(μL)12345
    10×CutFlash Buffer(μL)22345
    总体积(μL)2020304050
    注:如果总反应体系大于20μL,应适当增加温育时间,尽量使用水浴、金属浴或沙浴。

相关搜索:MspI限制性内切酶MspI内切酶MspI限制酶限制性内切酶MspIHpaIIHapIIBsiSICCGGLightFlash MspI Restriction Endonuclease
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